在常規色譜分離中,色譜峰形異常會造成實驗結果不準確,甚至是無法定性定量。峰形異常分多鐘情況,本期主要介紹出現伸舌峰時該如何排查解決:
1進樣破壞平衡或形成了二次進樣?
將樣品溶解在流動相中,或使用洗脫能力相對較弱的溶劑,也可以減小進樣量。
2色譜柱內填料出現塌陷?
用標準樣品的混合物,在盡可能與色譜柱評價報告條件相同的流動相和分析條件下,測試色譜柱的柱效(理論塔板數)。如果色譜柱柱效比測試報告上的柱效明顯下降,則要清洗色譜柱(按照相關方法),然后再重新測定色譜柱柱效。此時若色譜柱柱效無明顯提高,表明色譜柱內填料有塌陷,須更換色譜柱。若色譜柱比較新,則可與供應商聯系,討論是否是由于處理不當造成了柱內填料塌陷。
3保護柱柱效下降及被污染?
更換已經被污染的或柱效已經下降的保護柱后再測試系統的色譜柱效,正常情況下柱效應該上升。若柱效不上升,則應按前面討論的方法檢查色譜柱是否被污染或色譜柱效是否下降。
產生伸舌峰常見的原因是由于樣品溶解在與流動相不相溶的溶劑中,且進樣量過大。其次可能是由于保護柱或色譜柱被污染或色譜柱內調料產生了塌陷。